Molekiolan'ny fototarazo fomba fikarohana

Hijery sy hamantatra ireo variants amin'ny molekiolan'ny ADN rafitra nampiasa fomba fototarazo. Isaky ny DNA faritra, izay mandalina faritra ity ny krômôzôma, Gene na allele, tsy mitovy ny fomba. Fototra molekiolan'ny fototarazo tsirairay ahitana fomba filalaovana hafa ny sasany, na ny ARN sy ny ADN. Ireo rehetra ireo dia fomba iray lehibe mampiavaka pitsiny, tsy misy laboratoara fepetra tsy azo nentina nivoaka, ary ny mpiasa dia tsy maintsy ho tena mahafeno fepetra. Ity asa ity dia tanterahina amin'ny dingana maro.

dingana

Voalohany, ARN na ADN santionany mba ho vokarin'ny. Eto, ny molekiolan'ny fototarazo fomba azo ampiharina amin'ny saika misy ara-nofo: ny rano indray mitete-drà izy, leukocytes, fibroblasts kolontsaina, mucosa (ary norakofako), dia ny volo follicles, - ADN dia azo alaina any amin'ny misy santionany. Tsy mety ny mampiasa izay fomba molekiolan'ny fototarazo sy ny safidy isan-karazany, ary efa ela mitoka-monina ADN no voatahiry malalaka. Ny dingana faharoa, dia natokana ho amin'ny fanangonan-karena ny tiana sombintsombiny (amplification) ny ADN, araka ny manampy hiantohana ny polymerase rojo in vitro fanehoan-kevitra (in vitro tsy misy anjara velona taova). Ho vokany, ny voafantina DNA sombin mitombo, avy amin'ity gadra ity fanehoan-kevitra, ary ny habetsaky ny ADN mitombo ara-bakiteny an-tapitrisany fotoana.

Ny dingana fahatelo ao amin'ny molekiolan'ny fomba fikarohana fototarazo no heverina nihamaro ADN fameperana (izany Nizarazara, nandrovitra na fanapahana). Fameperana tanterahana amin'ny alalan'ny electrophoresis amin'ny polyacrylamide na agarose gel. Molekiolan'ny-fototarazo io fomba fandalinana ny ADN sombin mamela ny olona rehetra handray ny toerana sasany ao amin'ny gel. Taorian'izay, ny gel dia tsaboina amin'ny ethidium Brômira, afaka mamatotra ny ADN, ny irradiation amin'ny ultraviolet, dia azo atao ny hitandrina luminescence anjara. Molekiolan'ny fototarazo fomba fizahana aretina isan-karazany sy ny maro ireo, fa ny dingana roa voalohany dia mpahazo ny rehetra. Fa mba hamantarana ADN sombintsombin'ny mofo, ny gel azo miloko, ary efa misy fomba maro hafa.

karazana

Ny tena fomba mivantana sy miparitaka noho ny vao hita mycobacteria dia mety ahitana ny fototarazo molekiolan'ny ADN ambony fomba fianarana. Ny maha dia ny hoe, mba hamantarana ny Notarafina rojo ara-nofo ny sombiny manokana ny ADN ny otrikaretina. Molekiolan'ny fototarazo fizahana aretina teknika dia tsy mbola manana fomba mahomby kokoa mba hamantatra izany aretina toy ny raboka. Amin'ny alalan'ny fampiasana ny polymerase rojo fanehoan-kevitra (PCR), dia afaka matoky fa tany am-boalohany ADN dia hampitombo ny isan'ny gazety tamin'ny fotoana iray tapitrisa, izany hoe, hisy amplification, dia haneho ny vokatra. Ny tsy fahazakana ambaratonga Tena avo - mihoatra ny dimy amby sivi-folo isan-jato, izay no tena tombony izany fomba fiasa.

Fa ny sisa amin'ny molekiolan'ny-fototarazo fomba fikarohana momba ny fahombiazan'ny vokatra maro ara-bakiteny dika mitovy avo roa heny, satria amin'ity tranga ity dia mampiseho ny fandrafetana santionany oligonucleotide dingana manokana nitombo sy enina amby zato heny. Na dia ny kolontsaina ny aretina raboka ny taovam-pisefoana be hampidina ny fahatsapana. Izany no antony fanafody maoderina dia mifototra amin'ny fomba molekiolan'ny fototarazo ny aretina ny raboka. Ny voalaza dia fomba mahomby indrindra rehefa mifandray amin'ny otrikaretina ny avo antigenic variability, hamantatra izany fomba hafa dia mihoatra sarotra - dia mitaky manokana nutrient haino aman-jery sy ny miezaka ela. Biochemical sy ny molekiolan'ny fototarazo miteraka fomba tena samy hafa ny valim-pifidianana vokany eo.

aretina ny tioberkilaozy

Marshall PCR ny aretina raboka mahazatra indrindra mampiasa ireo ADN izay manokana ho an'ny efatra karazana ny aretina. Mba hanatrarana izany tanjona izany matetika mampiasa primers izay mamantatra filaharany NO singa (IS-986, NO-6110), toy ireo mpifindra monina singa tena mampiavaka karazana raboka sy foana Mycobacterium ankehitriny gazety maro ao amin'ny genome. Koa DNA fitrandrahana azo tanterahina amin'ny kolontsaina sy ny madio Clinical (sputum ny marary) amin'ny alalan'ny fomba hafa mety. Ohatra, misy fomba izay Boom ny lysis buffer no ampiasaina miorina amin'ny guanidine thiocyanate sy silica toy ny mitondra DNA. Ny isan'ny marary izay mitovy mahantra bacteriological mitombo isan-taona, ka noho izany amin'ny fomba fanao dia nametraka pitsaboana hafa tanteraka haavon'ny fikambanana: molekiolan'ny-fototarazo fomba fianarana ADN dia nilalao toerana lehibe amin'ny aretina.

Na izany aza, dia tsy maintsy miaiky fa tsy misy lafiny ratsy. Ny fomba PCR dia ny fampiasana matetika mitondra lehibe maro-diso vokatra tsara, sy ny antony ara-teknika dia tsy fahadisoana ihany, fa koa ny endri-javatra amin'ny fomba mihitsy. Ankoatra izany, amin'ny fampiasana io fomba aretina mba hamaritana ny viability ny mycobacteria, izay efa fantatra, dia azo atao tsotra izao. Anefa izany tombon-dahiny dia tsy manan-danja indrindra. Molekiolan'ny fototarazo fomba PCR diagnostics no mitarika ny mety ho fandotoana ny mycobacterial ADN. Fanamarinana takiana Noho izany, fa natao ho an'ny laboratoara PCR mafy fotsiny, mitaky telo samy hafa izy ireo hevi. PCR teknolojia maoderina sy tena sarotra, mitaky ny fampiasana ny fitaovana ilaina sy ny mpiasa voaofana avo-.

bacterioscopy

Rehefa ny aretina vokatry ny fanadihadiana dia tsy maintsy ampitahaina amin'ny hafa Data: pitsaboana mandinika, radiography, smear microscopy, vokatra ary na valin'ny fitsaboana manokana dia tena zava-dehibe. Ao amin'ny andian-dahatsoratra ity, ny PCR fanadihadiana ihany ny iray amin'ireo singa. Mamantatra ny pathogen ao amin'ny tany am-boalohany ny aretina dia mety ho fomba tsotra sy haingana - bacteriological.

Misy dia ampiasaina fahazavana mikraoskaopy (mandoko Ziehl-Neelsen) sy ny fluorescent (fandokoana fluorochromes). Ny tombony dia ny hafainganam-pandeha smear ny valim-pifidianana. Fa ny hantsana lalina manjaka dia heverina ara-drariny ny fahafahana voafetra ambany noho ny fahatsapana. Na izany aza, io no fomba nomena IZA tolo-kevitra toy indrindra ara-toekarena sy ny tany mamantatra raboka marary. Mamantatra ny mycobacteria bacteriological fomba faminaniana manana lanjany sy tombanana quantitatively excretion bakteria. Mainka matoky hiatrehana izany molekiolan'ny fototarazo fomba fikarohana ny raboka.

kolontsaina

Tsara mamantatra ny mycobacteria mahafantatra fampianarana ara-kolontsaina. Mamafy pathological zavatra mahatonga azy ity ho eo an-atody antonony: Mordovsky, Finn II, LJ, sy ny toy izany. Benchmarks ny fanoherana ny mycobacteria ny fanafody sy ankolaka porofo ny fahombiazan'ny maro mycobacteria sy ny zanatany in vitro, raha ny fomba ny fikarohana ampiharina kolontsaina. Mba hampitomboana ny isan-jaton'ny fitokana-monina ny mycobacteria inoculation ny pathological zavatra maro no natao ny tontolo.

Fihaonana ny zavatra ilain'ny maro be ara-kolontsaina, pathogen anisan'izany ny Grant sy ny tsiranoka. Ampiasaina eto amin'ity tontolo ity, ary mandeha ho azy ny fitomboana VANTES metering karazana. Voly tsy maintsy natao tao incubation mandritra ny fito ka hatramin'ny valo herinandro. Tamin 'izay fotoana ny vokatra noho ny tsy fahampian'ny fivoarana azo heverina ho ratsy. Ny fomba mahomby indrindra mba mamantatra Mycobacterium tioberkilaozy handinika biolojika santionany: fizahana aretina ara-nofo hanan-kery eo Ginea kisoa, izay tena mora TB.

Misy tarehimarika

Mahaliana sehatry ny fianarana, izay nisokatra ny PCR diagnostics dia ny hianatra ny M. tioberkilaozy - miseho aretina. Ny foto-kevitra ankehitriny ny TB aretina toa manondro fa avy zato vahoaka izay tao an mifandray amin'ny M. tioberkilaozy, amby sivi-folo mety ho voan'ny, fa folo amin'izy ireo no mpanao aretina dia namboarina. Ny hafa manana TB tsimatimanota, ary sivi-folo isan-jato noho ny toe-javatra miseho ny aretina mbola. Mahita lamina izany no nanampy ny molekiolan'ny fomba fototarazo.

Geneticists milaza fa dimy amby dimam-polo isan-jaton'ny olona izay pathological voly ara-nofo dia ratsy, ary ny valo-polo isan-jaton'ny olona mitondra ny tsimokaretina M. tioberkilaozy, nefa tsy nisy tondra-radiographic fisehoana ny aretina, PCR tsara fandraisan'ny olona ny hafatra. Izany dia fomba fizahana aretina fototarazo nanampy hamantatra marary tandindonin-doza ny PCR fampianarana, ary ny vokatry ny fandalinana (microscopy sy kolontsaina) dia ratsy, ary ny subclinical M. aretina raboka dia nanatrika.

maoderina fikarohana

Ny Federasiona Rosiana sy ny bacteriological laboratoara mampiasa ny fomba tanteraka haingana concentrations: nitrate reductase asa ny mycobacteria notsapaina ny Griess reagent. Anti-TB foibe mampiasa ny fomba izay mamela ny zava-mahadomelina mamaritra fanoherana. Zavatra tsy nanan in rano haino aman-jery, izay mandeha ho azy sy ny fluorescent kaonty radiometric rafitra fitomboan'ny mycobacteria. Fanadihadiana toy izany dia atao haingana - hatramin'ny tapa-bolana.

Amin'izao fotoana izao, fomba vaovao ireo dia mandroso: rongony fanoherana ny mycobacteria dia refesina amin'ny sehatry ny genotype. Fianarana ny molekiolan'ny fiasan'ny fototarazo ny fanoherana sy mampiseho ny fisian'ny in mycobacteria. Ireo dia mifandray amin'ny fototarazo ny fanoherana ny zava-mahadomelina sasany. Ohatra, kasa fototarazo, inhA, katG mahatohitra ny isoniazid, rpoB fototarazo - rifampicin 16Sp fototarazo sy ny ARN rpsL - streptomycin, emb1 - ny ethambutol, gyrA - ny fluoroquinolone sy ny sisa.

fiovana

Ny ankehitriny ny aretina be nampitombo ny molekiolan'ny-fototarazo anivon'ny noho ny fomba fianarana ADN, ary navela hanatanteraka goavana fampianarana ny fiovan'ny fototarazony rehetra ny karazany. Ary fantatsika fa ny tena fiovana fahita ao amin'ny 516, 526 sy 531 codons ny rpoB Gene, ary fantatra ny fanoherana isan-karazany ny zava-mahadomelina. Misy fomba isan-karazany rehetra ho amin'ny fanoratana ny mycobacteria tsy mampiasa fomba nentim-paharazana ihany - biochemical, biolojika sy ara-kolontsaina, fa be mpampiasa koa ny molekiolan'ny maoderina fototarazo teknika. Efa misy ny ampy ary manome ny fomba aretina marina ny mamantatra ny monogenic aretina. Izy ireo dia mifototra amin'ny ADN Fianarana ny tena faritra iray manokana fototarazo. Izany no matetika dia dingana sarotra, mandany fotoana sy lafo, fa ny tahirin-kevitra izay nomen'ny molekiolan'ny fanadihadiana fototarazo, fa tsy hoe zavatra marina sy ahalalan-javatra noho ny angon-drakitra rehetra fandalinana hafa.

Efa ela no fantatra fa ny ADN tsy miova ny fiainany manontolo ny-draharaha fa ny any tsy nucleated sela odnakova, ary izany dia ahafahana maka ny famakafakana ny tena rehetra, ny sela ao amin'ny vatana, na oviana na dingan'ny ontogeny. Ny fototarazo simba azo hita eo anoloan'ny endriky ny soritr'aretina voalohany ho voky-pitsaboana ambaratonga aretina, ary koa ao amin'ny olona salama heterozygous, fa manana ny mutation ao amin'ny fototarazo. Molekiolan'ny fototarazo aretina manaranaka fizahana aretina fomba mamela ny nampiseho ny (mivantana fomba, ADN-diagnostics), ary koa ny mba handinika ny fanavakavahana ny aretina ao amin'ny fianakaviana miaraka amin'ny fanamarihana toerana loci ADN (fototarazo polymorphisms), izay akaiky mifandray amin'ny simba Gene (izany hoe, ny ankolaka fomba ny ADN-diagnostics). Mivantana na ankolaka - misy ADN diagnostics dia mifototra amin'ny famantarana ny fomba iray famaritana hentitra ampahany amin 'ny olombelona ADN.

fomba mivantana

Fomba mivantana ny ADN aretina ireo, raha ny meloka fototarazo aretina manaranaka dia fantatra, araka ny fantatra, ary ny karazana ny fiovan'ny fototarazony. Ohatra, mety tsara amin'ny fomba mivantana ny aretina maro. Ity Huntington ny chorea (fanitarana CTG-averin'i), phenylketonuria (R408W), cystic fibrosis (delF508, fiovana lehibe) sy ny toy izany. Ny tena manararaotra amin'ny fomba mivantana dia tompony tanteraka fizahana aretina-marina, ary tsy ilaina ny manao ny ADN fandalinana ny sisa amin'ny fianakaviana. Raha misy mutation ao amin'ny mifanaraka Gene hita, mamela hanaiky mihitsy vao fantatra ilay aretina fandovan-toetra, genotype fahavononana ho an'ny sisa amin'ny fianakaviana ny mavesatra.

Iray hafa mivantana mahatsara ny aretina dia heverina hamantatra ny heterozygous mitondra ny ratsy fiovan'ny fototarazony avy amin'ny havany sy ray aman-dreny maty noho ny aretina. Marina indrindra izany ho an'ny aretina autosomal recessive. Fatiantoka ny fomba mivantana koa misy. Hampihatra azy ireo, tokony ho fantatsika mazava tsara ny localize ny ara-dalàna fototarazo, exon-intron rafitry ny ny karazany sy ny fiovan'ny fototarazony. Tsy ny rehetra amin'izao andro izao monogenic aretina efa nahazo teny toy izany fanazavana. Informativeness mivantana fomba tsy azo heverina ho tanteraka, satria iray ihany fototarazo mety ho maro ny pathological mutation izay miteraka fampandrosoana ny aretina manaranaka.

fomba tsy mivantana

Tsy mivantana fomba in ADN diagnostics ampiasaina mihitsy, amin'ny hafa, toe-javatra, raha ny simba fototarazo tsy fantatra, fa chromosomally, na raha ny tsipika aretina tsy nanome ny vokatra (tonga izany, raha toa ny fototarazo sarotra molekiolan'ny fikambanana na lehibe hatraiza, raha misy be dia be pathological fiovana). Fomba mivantana nanao fanadihadiana ny polymorphic fanavakavahana marika eo amin'ny allelic fianakaviana. Marika hita tao amin'izany faritra na locus chromosomal akaiky mifandray amin'ny aretina, ary misolo tena ny famafana na insertions, hevitra substitutions, averin'i, ary ny polymorphism dia noho ny habetsaky ny sela samy hafa ao amin'ny andian-tsoratra.

Tena mety ho an'ny fitiliana mivantana heverina microsatellite sy minisatellite polymorphisms, izay niely tao an-olombelona genome. ny zava-dehibe voalaza ao amin'ny avo afa-po vaovao, raha simba ny elanelana misy eo amin'ny fototarazo sy ny fototarazo fanamarihana toerana dia tsy lehibe loatra. Ao amin'ny tranga farany, ny tombany marina dia tapa-kevitra ny lehibe hatraiza ny matetika ny recombination eo amin'ny polymorphic fanamarihana toerana sy ny zavatra simba. Tsy mivantana koa ny fomba fizahana aretina maintsy manome dingana mialoha ny allele peo ny mponina nandinika fianarana eo amin'ny marary sy ny mpitondra ny fiovan'ny fototarazony, miampy ny ilana ny famaritana ny mety ho recombination ny nonequilibrium sy ny hidiran'i mpanamarika sy mutant alleles.

fomba hafa

Short fizarana ny ARN na ny ADN, ary koa ny fototarazo tokana visualized ambany fianarana bitika tsy afaka ny ho, noho izany, mba hamantarana ny fiovan'ny fototarazo ilaina ny molekiolan'ny fototarazo aretina. Misy "Human Genome Tetikasa", ary koa fandrosoana hafa ao amin'ny fototarazo molekiolan'ny indrindra nitarina ny mety ny aretina ny aretina manaranaka - na pre- sy postnatal. Ireo fomba maraina koa dia afaka manome mamantatra sy manao faminaniana poly- sy monogenic aretina, izay bitany atao in rehefa lehibe. Indrisy anefa, noho ny fahaiza-manao ara-teknika ny molekiolan'ny fototarazo fianarana ireo indraindray any an-dafin'ny etika fetra izay napetrany momba ny lova, indrindra rehefa ny aretina ao zatovo sy ny fahazazana.

Ara-drafitra sy ara-dalàna isa chromosomal fahita indrindra no mahatonga ny aretina sy ny kansera, ary maro malformations. Chromosomal aberrations Mila ho fantatra, izay zava-dehibe ho an'ny fianakaviana torohevitra - mba hijery ny Forecast, miaraka amin'ny pananahana doza amin'ny ho avy vohoka. Krômôzôma fandinihana dia ny "volamena faneva" ny fototarazo aretina, nefa voafetra. Ihany ny fomba ny molekiolan'ny fanadihadiana fototarazo afaka manao bebe kokoa, satria tsy nampiasa ny teknolojia ara Fanamboarana fluorescent etikety afaka ny fahatsapana avo mba hamantarana-kolaka chromosomal fiovana izay tsy hain'ny ny mamantatra kilasika cytogenetic fianarana. Ireo teknika no miha-hanitatra ny fahaiza-manao fizahana aretina, rehefa nandinika, ny ankizy manana fahasembanana amin'ny fitomboana, sembana ara-tsaina, miaraka amin'ny maro hafa aretina manaranaka.

hita

Tena zava-dehibe ho an'ny olombelona dia ny fototarazo sy ny firafitry miasa amin'ny fahalalana, karazana variability, ny fahaiza-mamantatra aretina manaranaka izay nitranga mifandray amin'ny ny fampandrosoana ny molekiolan'ny fototarazo. ny fomba dia mikendry ny fandalinana ny ADN - ary raha ara-dalàna izany, ary rehefa simba. Fanomanana ny acide asidra sequences ny nucleotides (ADN) dia mivelatra ao amin'ny dingana tsy handray santionany hamantatra sombiny tsirairay. Fitokana-monina ny genomic ADN avy amin'ny sela, fameperana (mamiravira), amplification (Fanamboarana), electrophoresis ny sombintsombiny (manasaraka ny herinaratra fiampangana sy ny molekiolan'ny lanja ny agarose gel). Famantarana ny sombiny manokana miorina eny ambonin'ny iray discrete mivatra.

Ary mahazo any an-asa sivana manokana, amin'ny alalan'ny izay mandalo sombin tsirairay hybridization amin'ny ADN cloned sombintsombin'ny na synthetic radiôaktifa Milaza koa dia fanaraha-maso, izay ho mitovy amin'ny fitsapana tsirairay santionany. Raha hanova ny toerana na lavany raha oharina amin'ny ny fangadiana, raha vaovao sombiny na nanjavona - izany rehetra izany dia toa manondro fa ny fototarazo efa nasiam-nandinika ny rafitra ao amin'ny nucleotide filaharany. Misy valo fototra teknika ny molekiolan'ny fototarazo fampianarana: sequencing (tapa-kevitra ny ADN filaharany), polymerase rojo fanehoan-kevitra (mitombo ao ny isan'ny sequences), ny fanomanana ny primers fantatra fototarazo, DNA Fanamboarana, famokarana ny recombinant molekiola ampy proteinina noho ny recombinant molekiola, mamorona tanteraka napetraka (famoriam-bola trano famakiam-boky) cloned sombina izay azo amin'ny alalan'ny fampiasana famerana.